諾博萊德 高爾基體提取試劑盒

高爾基體提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：P4934

產(chǎn)品名稱：高爾基體提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：高爾基體提取試劑盒

規(guī)格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P4934 高爾基體提取試劑盒

適用樣本：動物細(xì)胞/組織

產(chǎn)品介紹

高爾基體（Golgi apparatus, Golgi bodies）是由許多扁平的囊泡構(gòu)成的以分泌為主要功能的細(xì)胞器。又稱高爾基器或高爾基復(fù)合體；高爾基體是由數(shù)個扁平囊泡堆在一起形成的高度有 極性的細(xì)胞器。常分布于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與細(xì)胞膜之間，呈弓形或半球形，凸出的一面對著內(nèi)質(zhì)網(wǎng)稱 為形成面（forming face）或順面（cis face）。凹進的一面對著質(zhì)膜稱為成熟面（mature face）或反面（trans face）。順面和反面都有一些或大或小的運輸小泡，在具有極性的細(xì)胞 中，高爾基體常大量分布于分泌端的細(xì)胞質(zhì)中。因其看上極像滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，因此有科學(xué)家認(rèn) 為它是由滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進化而來的。

高爾基體中的酶主要有糖基轉(zhuǎn)移酶、磺基-糖基轉(zhuǎn)移酶、氧化還原酶、磷酸酶、蛋白激酶、 甘露糖苷酶、轉(zhuǎn)移酶和磷脂酶等不同的類型。高爾基體的主要功能將內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成的蛋白質(zhì)進 行加工、對比分類、與包裝，然后分門別類地送到細(xì)胞特定的部位或分泌到細(xì)胞外。

本試劑盒可用于各種動物細(xì)胞和實體軟、硬組織樣本的高爾基體提取。

注：

1. 提取液長期不用時置于-20℃保存，15 天內(nèi)多次使用的話置于 4℃保存即可。

2. 試劑拆封后請盡快用完。

需自備試劑及設(shè)備

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒、1×PBS 緩沖液、離心管、吸頭、一次性手套 、細(xì)胞篩

使用方法（僅供參考）：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 最好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒有 Dounce 勻漿器，用普通 1ml 玻璃勻漿器勻漿也可，但是

高爾基體回收率可能會下降。

二、細(xì)胞高爾基體提?。?/span>

1. 取 1-2×10⁷個細(xì)胞，在 4℃，500×g 條件下離心 2-3 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

注：貼壁培養(yǎng)細(xì)胞用yi酶消化下來或者用刮刀刮取均可。

2. 用冷 PBS 洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

注：用 1000×g 力離心 5 分鐘。

3. 加入 500μl 冷的試劑 A 重懸細(xì)胞，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿幾分鐘。

注：先用 Doumce 勻漿器的松型槌初步勻漿 20-30 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。

每上下一個來回為一次。

5. 將勻漿液在 4℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘。

6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，棄沉淀。

7. 將上清在 4℃，3000×g 條件下離心 10 分鐘。

8. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，棄沉淀。

9. 將上清在 4℃，5000×g 條件下離心 10 分鐘。

10. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，棄沉淀。

11. 在上清中加入 10μl 試劑 WT。

12. 在 4℃，20000×g 條件下離心 20 分鐘。棄上清，留沉淀。

注：沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

13. 在沉淀中加入 500μl 冷的試劑 B，輕輕混勻。

14. 在 4℃，20000×g 條件下離心 30 分鐘。

15. 棄上清，沉淀用高爾基體保存液重懸。

注：也可不用試劑盒中的高爾基體保存液重懸。

根據(jù)實驗需要選擇合適的緩沖液重懸高爾基體或直接用于下游實驗。

沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

16. 即得到高爾基體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

三、組織高爾基體提?。?/span>

1. 取 50 mg -100 mg 新鮮動物組織樣本，用 PBS 洗滌干凈。

2. 用手shu剪刀盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。

注：用 1000×g 力離心 5 分鐘。

3. 加入 500μl 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿幾分鐘。

注：先用 Doumce 勻漿器的松型槌初步勻漿 20-30 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。

每上下一個來回為一次。

5. 將勻漿液在 4℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘。

6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，棄沉淀。

7. 將上清在 4℃，3000×g 條件下離心 10 分鐘。

8. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，棄沉淀。

9. 將上清在 4℃，5000×g 條件下離心 10 分鐘。

10. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，棄沉淀。

11. 在上清中加入 10μl 試劑 WT。

12. 在 4℃，20000×g 條件下離心 20 分鐘。棄上清，留沉淀。

注：沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

13. 在沉淀中加入 500μl 冷的試劑 B，輕輕混勻。

14. 在 4℃，20000×g 條件下離心 30 分鐘。

15. 棄上清，沉淀用高爾基體保存液重懸。

注：也可不用試劑盒中的高爾基體保存液重懸。

根據(jù)實驗需要選擇合適的緩沖液重懸高爾基體或直接用于下游實驗。

沉淀是離心管底部薄薄一層。不是明顯團塊。

16. 即得到高爾基體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得優(yōu)良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

高爾基體提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息：

P4934  高爾基體提取試劑盒  50T/100T